哺乳动物GABA受体α1亚基与果蝇LCCH3亚基的克隆、表达及二级结构测定

摘要

通过RT-PCR技术以人脑CDNA文库和果蝇CDNA为模板，克隆了哺乳动物GABAA受体α1亚基信号肽除外的大部分基因片断和果蝇GABA受体亚基LCCH3胞外区域，将它们分别克隆至pET-30a和pET-32a表达载体上，测序结果表明获得的序列与基因库中已发表的基因序列同源性达99﹪，无移码突变，且在IPTG的诱导下，在大肠杆菌中进行了成功的表达。并采用镍柱亲和层析法纯化了目的蛋白，对纯化蛋白采用圆二色谱法测定了二级结构，表明α1为α-螺旋结构与无规卷曲相混合的构象状态，而LCCH3为富含β结构和相对宽的α链的组分，并将与农药有关的3个氨基酸进行定点突变和诱导表达，表明Arg67，Thr26l的突变可以使蛋白对氟虫腈的结合力增强。