稻瘟病菌钙调素基因的克隆及原核表达特性研究

摘要

采用RT-PCR技术从稻瘟病菌PO-041菌株中克隆到钙调素基因,cDNA全长450bp,编码149个氨基酸,预测的蛋白(MgCaM)大小为17.0kD.将钙调素基因进行原核表达,得到了分子量为35 kD的融合蛋白(Trx-MgCaM);30℃诱导条件下,Trx-MgCaM可溶性融合蛋白比例达到90%.利用抗-拟南芥CaM2的多克隆抗体对Trx-MgCaM进行western定性检测,在35 kD处有单一条带,表明Trx-MgCaM能和钙调素多克隆抗体发生免疫反应.利用纯化后的Trx-MgCaM进行Ca2+依赖的凝胶迁移实验,在Ca2+和EGTA存在的条件下,MgCaM具有明显的凝胶迁移现象,表明稻瘟病菌MgCaM的活性依赖于Ca2+.