玉米大斑病菌STKK2基因同源片段的克隆及其拷贝数验证

摘要

MAPK信号途径参与了多种病原真菌菌丝生长、分生孢子形成及萌发、附着孢形成、黑色素产生等过程.本试验根据已知病原真菌MAPKK氨基酸保守序列设计简并引物,采用PCR技术、染色体步移技术扩增得到了STKK2(1550bp)的同源片段,经Blastp比对发现,该片段与小麦黄斑叶枯病菌(Pyrenophora tritici-repentis)、小麦颖枯病菌(Phaeosphaeria nodorum)、棒曲霉(Aspergillus clavatus)、粗糙麦孢霉(Neurospora crassa)、葡萄孢盘菌(Botryotinia fuckeliana)的MAPKK基因同源性达62%～89%.Southern blotting分析发现,该基因在玉米大斑病菌基因组中以单拷贝形式存在.为下一步进行基因的敲除或缺失试验,验证STKK2基因在玉米大斑病菌致病性中的作用提供了有力的证据.