香蕉枯萎病菌β-微管蛋白基因分子检测研究

摘要

香蕉枯萎病是由尖镰孢古巴专化型Fusarium oxysporum f.sp.cubense(FOC)引起的一种世界范围的毁灭性病害.本研究探索β-微管蛋白基因(β-tubulin)保守序列建立一种PCR检测方法用于从感病组织及根际土壤中检测香蕉枯萎菌.利用β-微管蛋白基因(β-tubulin)通用引物(T1/T22)扩增我国香蕉枯萎病菌2个生理小种(1号和4号)的基因序列,基于β-tubulin基因序列的多态性设计的特异性引物(tub1/tub2)可以从海南、广东分离的18个菌株中扩增到单一明显的497 bp条带,检测灵敏度为10 pg(10-11g)DNA或者105孢子/g土壤.将通用引物作为外侧引物、设计的特异性引物作为内侧引物建立的巢式PCR可以将检测灵敏度提高1000倍达到10fg(10-14g)DNA或102个孢子/g土壤.我们将传统鉴定方法与分子检测相结合,2005年对海南和广东部分香蕉种植地区进行抽样检测结果显示,该技术可以为香蕉枯萎菌的检测监控和病害综合防治提供理论指导.