两种型特异性引物聚合酶链反应法检测乙型肝炎病毒基因型及亚型的评价

摘要

目的：比较并评价本研究室和日本Naito等建立的乙型肝炎病毒(HBV)型特异性引物聚合酶链反应(PCR)基因分型法。rn 材料和方法：分别用新方法和Naito法，检测系列稀释的含有A、D基因型和B1、C2亚型HBV基因组的质粒及不同浓度比例的Bj/C2亚型混合质粒，评价两种方法的灵敏度和特异度。另外，用两种方法分别对深圳市、河北邯郸市、新疆乌鲁木齐市送检的113份HBV DNA阳性慢性乙型肝炎患者的血清标本进行HBV基因分型，并对两种分型方法检测结果不一致的血清样本用PCR产物直接测序法验证。rn 结果：用含有不同基因型HBV基因组的质粒及不同浓度比例的Bj/122亚型混合质粒评价两种方法的灵敏度和特异度，结果显示，两种方法的灵敏度无差异，而新方法的特异度明显优于Naito法。并且经一次巢氏PCR，新方法即可直接检测出C1和C2基因亚型。两种方法检测单一基因型血清标本的灵敏度无差异，对HBV DNA浓度为102～109拷贝/ml血清标本的检出率均为100%，并可检测出≤5×102拷贝/ml的血清标本。但新方法对B/C混合型样本的检出率更高。两种方法检测结果的总符合率为83.2%，不一致率为16.8%。从19份两法分型不一致的血清标本中，随机选取7份以PCR产物直接测序法进行验证，测序结果与新方法检测结果完全一致。rn 结论：本室建立的HBV型特异性引物-PCR基因分型法具有较高灵敏度，且特异度明显优于目前临床上常用的Naito等建立的方法，适用于大规模的临床样本检测及流行病学调查，对我国HBV基因型及基因亚型的研究提供了新的有力的手段。