诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经元样细胞的研究

摘要

目的：优化“序贯诱导法”实验条件，建立一种稳定、高效、简便的实验方法，将小鼠胚胎干细胞诱导分化为神经元样细胞。方法：在饲养层细胞上培养小鼠胚胎干细胞，优化“序贯诱导法”的实验条件，对诱导后细胞进行成熟神经细胞标志物鉴定，并用流式细胞仪测定诱导分化比率。结果：1.生长于饲养层上的未分化小鼠胚胎干细胞聚集呈圆形或椭圆形集落样生长，细胞排列紧密，集落边界清楚。诱导分化的细胞于第2天出现一定的形态变化，细胞呈多角形，随后，逐渐伸出突起，向四周伸展，与邻近分化细胞交织成网状，出现突触样结构和生长端样结构，形似神经元。2.优化后的“序贯诱导法”在诱导时首次接种所用培养液的血清浓度为12.5％，小鼠胚胎干细胞首次接种最佳密度为1.0×105/ML-1.0×106/ML。3.诱导后第10天细胞免疫荧光法检测神经元特异性抗原TUJ1、NeuN和NCAM1表达阳性；蛋白质免疫印记法检测TUJ1表达阳性。4.流式细胞仪检测NeuN阳性细胞百分比，计算出诱导第10天分化比率为89.91％±2.03％。结论：应用优化后的“序贯诱导法”，可稳定、简便的诱导小鼠胚胎干细胞高比率分化为神经元样细胞。