佛肚竹RAPD反应体系的建立与优化

摘要

以佛肚竹叶片提取的基因组DNA为材料，通过单因素多水平梯度试验，筛选DNA模板，Mg2+，TaqDNA聚合酶，dNTPs和随机引物的浓度及用量，建立佛肚竹RAPD技术分析体系。结果表明：当20μlRAPD-PCR反应体系中，含约40ng模板DNA、3.5mmolMgCl2、0.4 mmoldNTP、0.6μmol引物、2UTaqDNA聚合酶和2μll0×Buffer时，出现可辨认的清晰普带。其扩增程序为：94℃预变性2min；94℃变性30s，34℃退火30s，70℃延伸90s，38个循环；72℃延伸7min；置4℃保存。应用RAPD体系对5份佛肚竹种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。