重组表达猪圆环病毒2型Cap蛋白纯化及其抗原性分析

摘要

根据GenBank中登录的PCV-2序列，设计一对特异性引物，扩增PCV-2去核定位信号(nuclear logalizationsignal，NLS)的Cap蛋白基因，经BarnHI和XhoI双酶切后将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中，并转化到表达菌株Rossetta(DM3)中，采用IPTG进行诱导表达，使用GST-ProteinPurtification Kit亲和层析纯化方法对表达的GST融合蛋白蛋白进行纯化，采用SDS-PAGE薄层分析纯化效果。Western blot鉴定纯化后的重组Cap蛋白(rCap)活性.结果表明，成功克隆了无核定位信号的ORF2基因，其大小为579bp，表达的rCap蛋白大小45.3ku，与预期大小向一致;纯化后的rCap蛋白SDS-PAGE电泳检测只存在一条目的条带，纯度达到90%以上.Western blot分析表明，纯化的目的蛋白与PCV-2阳性血清发生特异性免疫学反应，具有良好的抗原性.