内含子A增强Hsp65在真核细胞中的表达效率及提高DNA疫苗在小鼠中的免疫原性

摘要

目的：探讨以内含子A增强外源抗原在真核细胞中的表达效率及提高DNA疫苗在小鼠中的免疫原性。方法：以分枝杆菌Hsp65为模式抗原，将其分别克隆入含有内含子A和不含内含子A的真核表达载体pCMV4.0和pVAX1，将表达Hsp65的不同重组质粒时转染人胚肾上皮细胞系293T并免疫接种BAIB/c小鼠，以ELISA分析其所诱导产生的抗原特异性抗体水平及亚类，并以ELISPOT和胞内细胞因子染色技术分析其诱导产生的细胞免疫应答反应。结果：含有内含子A的重组表达质粒pCMV4.0hsp65较之不含内含子A的pVAX1hsp65在293T细胞中的抗原表达量更高，免疫小鼠后诱导产生的Anti.Hsp65特异性总IgG和IgG2a抗体水平也更高，分泌IFN-γ的CD4+和CD8+T淋巴细胞频率增加，提示其诱导产生了增强的Th1型免疫应答。结论：内含子A可增强Hsp65在真核细胞中的表达效率并可提高DNA疫苗在小鼠中的免疫原性。